WS 394-2012 gōng gòng chǎng suǒ jí zhōng kōng tiáo tōng fēng xì tǒng wèi shēng guī fàn
Hygienic specification of central air conditioning ventilation system in public buildings
《公共場所集中空調(diào)通風系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》由衛(wèi)生部于2012年9月19日衛(wèi)通〔2012〕16號發(fā)布，自2013年4月1日起實施。衛(wèi)生部于2006年發(fā)布的《公共場所集中空調(diào)通風系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》自2013年4月1日起廢止。
ICS 91.140.30
C 51
WS 394-2012
公共場所集中空調(diào)通風系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范
Hygienic specification of central air conditioning ventilation system in public buildings
本標準按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。
本標準由衛(wèi)生部環(huán)境衛(wèi)生標準專業(yè)委員會提出。
本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部批準。
本標準負責起草單位：中國疾病預防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所、江蘇省疾病預防控制中心、深圳市疾病預防控制中心。
本標準主要起草人：姚孝元、金銀龍、劉凡、王俊起、戴自祝、張秀珍、于淑苑、孫波、金鑫、王艷、朱文玲、韓旭。
公共場所集中空調(diào)通風系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范
本標準規(guī)定了公共場所集中空調(diào)通風系統(tǒng)（以下簡稱集中空調(diào)系統(tǒng)）的設計、質(zhì)量、檢驗和管理等衛(wèi)生要求。
本標準適用于公共場所使用的集中空調(diào)系統(tǒng)，其他場所集中空調(diào)系統(tǒng)可參照執(zhí)行。
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
單位時間內(nèi)由集中空調(diào)系統(tǒng)進入室內(nèi)的室外空氣的量，單位為m3／（h·人）。
懸浮在空氣中，空氣動力學當量直徑小于等于10 μm，能夠進入人體喉部以下呼吸道的顆粒狀物質(zhì)，簡稱PM10。
集中空調(diào)風管內(nèi)表面單位面積灰塵的量，單位為g/m2。
3.1 集中空調(diào)系統(tǒng)新風量的設計應符合表1的要求。
表1 新風量要求
3.2 集中空調(diào)系統(tǒng)送風溫度的設計宜使公共浴室的更衣室、休息室冬季室內(nèi)溫度達到25℃，其他公共場所在16℃～20℃之間；夏季室內(nèi)溫度在26℃～28℃之間。
3.3集中空調(diào)系統(tǒng)送風濕度的設計宜使游泳場（館）相對濕度不大于80%，其他公共場所相對溫度在40%～65%之間。
3.4 集中空調(diào)系統(tǒng)送風風速的設計宜使賓館、旅店、招待所、咖啡館、酒吧、茶座、理發(fā)店、美容店及公共浴室的更衣室、休息室風速不大于0.3 m/s。其他公共場所風速不大于0.5 m／s。
3.5 對有睡眠、休憩需求的公共場所，集中空調(diào)系統(tǒng)運行所產(chǎn)生的噪聲對場所室內(nèi)環(huán)境造成的影響不得高于設備設施關(guān)閉狀態(tài)時室內(nèi)環(huán)境噪聲值5 dB（A計權(quán)）。
3.6 集中空調(diào)系統(tǒng)應具備下列設施：
a） 應急關(guān)閉回風和新風的裝置；
b） 控制空調(diào)系統(tǒng)分區(qū)域運行的裝置；
c） 供風管系統(tǒng)清洗、消毒用的可開閉窗口，或便于拆卸的不小于300 mm×250 mm的風口。
3.7 集中空調(diào)系統(tǒng)宜設置去除送風中微生物、顆粒物和氣態(tài)污染物的空氣凈化消毒裝置。
3.8 集中空調(diào)系統(tǒng)的新風應直接取自室外，不應從機房、樓道及天棚吊頂?shù)忍庨g接吸取新風。
3.9 集中空調(diào)系統(tǒng)的新風口應設置防護網(wǎng)和初效過濾器，并符合以下要求：
a） 設置在室外空氣清潔的地點，遠離開放式冷卻塔和其他污染源；
b） 低于排風口；
c） 進風口的下緣距室外地坪不宜小于2m，當設在綠化地帶時，不宜小于1 m;
d） 進排風不應短路。
3.10 集中空調(diào)系統(tǒng)的送風口和回風口應設置防蟲媒裝置，設備冷凝水管道應設置水封。
3.11 集中空調(diào)系統(tǒng)加濕方式宜選用蒸汽加濕，選用自來水噴霧或冷水蒸發(fā)的加濕方式應有控制軍團菌繁殖措施，
3. 12 集中空調(diào)系統(tǒng)開放式冷卻塔應符合下列要求：
a）開放式冷卻塔的設置應遠離人員聚集區(qū)域、建筑物新風取風口或自然通風口，不應設置在新風口的上風向，宜設置冷卻水系統(tǒng)持續(xù)消毒裝置；
b）開放式冷卻塔應設置有效的除霧器和加注消毒劑的入口；
c）開放式冷卻塔水池內(nèi)側(cè)應平滑，排水口應設在塔池的底部。
3.13 集中空調(diào)系統(tǒng)風管內(nèi)表面應當光滑，易于清理。制作風管的材料不得釋放有毒有害物質(zhì)，宜使用耐腐蝕的金屬材料；采用非金屬材料制作風管時，必須保證風管的堅固及嚴密性，具有承受機械清洗設備工作沖擊的強度。
4.1 集中空調(diào)系統(tǒng)新風量應符合表1的要求。
4.2 集中空調(diào)系統(tǒng)冷卻水和冷凝水中不得檢出嗜肺軍團菌。
4.3 集中空調(diào)系統(tǒng)送風質(zhì)量應符合表2的要求。
表2送風衛(wèi)生指標
4.4 集中空凋系統(tǒng)風管內(nèi)表面衛(wèi)生指標應符合表3的要求。
表3風管內(nèi)表面衛(wèi)生指標
5.1 應建立集中空調(diào)系統(tǒng)衛(wèi)生檔案，主要包括以下內(nèi)容：
a） 集中空調(diào)系統(tǒng)竣工圖；
b） 衛(wèi)生學檢測或評價報告書；
c） 經(jīng)常性衛(wèi)生檢查及維護記錄；
d） 清洗、消毒及其資料記錄；
e） 空調(diào)故障、事故及其他特殊情況記錄。
5.2 應定期對集中空調(diào)系統(tǒng)進行檢查、檢測和維護。
5.3 應定期對集中空調(diào)系統(tǒng)下列部位進行清洗：
a） 開放式冷卻塔每年清洗不少于一次；
b） 空氣凈化過濾材料應當每六個月清洗或更換一次；
c） 空氣處理機組、表冷器、加熱（濕）器、冷凝水盤等每年清洗一次。
5.4 集中空調(diào)系統(tǒng)出現(xiàn)下列情況時，應對相關(guān)部位進行清洗消毒：
a） 冷卻水、冷凝水中檢出嗜肺軍團菌；
b） 送風質(zhì)量不符合表2要求的；
c） 風管內(nèi)表面積塵量、細菌總數(shù)、真菌總數(shù)有不符合表3要求的。
5.5 應制定集中空調(diào)系統(tǒng)預防空氣傳播性疾病的應急預案，主要包括以下內(nèi)容：
a） 集中空調(diào)系統(tǒng)進行應急處理的責任人；
b） 不同送風區(qū)域隔離控制措施、最大新風量或全新風運行方案、空調(diào)系統(tǒng)的清洗、消毒方法等；
c） 集中空調(diào)系統(tǒng)停用后應采取的其他通風與調(diào)溫措施等。
5.6 當空氣傳播性疾病暴發(fā)流行時，符合下列條件之一的集中空調(diào)系統(tǒng)方可繼續(xù)運行：
a） 采用全新風方式運行的；
b） 裝有空氣凈化消毒裝置，并保證該裝置有效運行的；
c） 風機盤管加新風的空調(diào)系統(tǒng)，能確保各房間獨立通風的。
5.7 當空氣傳播性疾病暴發(fā)流行時，應每周對運行的集中空調(diào)系統(tǒng)的開放式冷卻塔、過濾網(wǎng)、過濾器、凈化器、風口、空氣處理機組、表冷器、加熱（濕）器、冷凝水盤等設備或部件進行清洗、消毒或者更換。
6.1.1 抽樣比例不應少于空氣處理機組對應的風管系統(tǒng)總數(shù)量的5%；不同類型的集中空調(diào)系統(tǒng)．每類至少抽1套。
6.1.2 每套應選擇2個～5個代表性部位。
6.1.3 集中空調(diào)系統(tǒng)的冷卻水和冷凝水分別不應少于1個部位。
6.2.1 集中空調(diào)系統(tǒng)新風量檢測方法見附錄A。
6.2.2 集中空調(diào)系統(tǒng)冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團菌檢驗方法見附錄B。
6.2.3 集中空調(diào)送風中可吸入顆粒物檢測方法見附錄C。
6.2.4 集中空調(diào)送風中細菌總數(shù)檢驗方法見附錄D。
6.2.5 集中空調(diào)送風中真菌總數(shù)檢驗方法見附錄E。
6.2.6 集中空調(diào)送風中β一溶血性鏈球菌檢驗方法見附錄F。
6.2.7 集中空調(diào)送風中嗜肺軍團菌檢驗方法見附錄G。
6.2.8 集中空調(diào)風管內(nèi)表面積塵量檢驗方法見附錄H。
6.2.9 集中空調(diào)風管內(nèi)表面微生物檢驗方法見附錄I。
當檢測結(jié)果為下列情況之一的，判定該套集中空調(diào)系統(tǒng)不符合衛(wèi)生質(zhì)量要求：
a） 冷卻水或冷凝水中有嗜肺軍團菌檢出的；
b） 新風量檢測結(jié)果不符合表1要求的；
c） 單個風口送風中細菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β一溶血性鏈球菌、嗜肺軍團菌檢測結(jié)果有不符合表2要求的；
d） 抽取的各個風口送風中PM10的平均值不符合表2要求的；
e） 風管內(nèi)表面積塵中細菌總數(shù)、真菌總數(shù)檢測結(jié)果有不符合表3要求的；
f） 風管內(nèi)表面各采樣點積塵量檢測結(jié)果的平均值不符合表3要求的。
本附錄規(guī)定了用風管法測定集中空調(diào)系統(tǒng)的新風量，即直接在新風管上測定新風量的方法。
在機械通風系統(tǒng)處于正常運行或規(guī)定的工況條件下，通過測量新風管某一斷面的面積及該斷面的平均風速，計算出該斷面的新風量。如果一套系統(tǒng)有多個新風管，每個新風管均要測定風量，全部新風管風量之和即為該套系統(tǒng)的總新風量，根據(jù)系統(tǒng)服務區(qū)域內(nèi)的人數(shù)，便可得出新風量結(jié)果。
A.3.1 標準皮托管：Kp=0.99±0.01，或S型皮托管Kp=0.84±0.01。
A.3.2 微壓計：精確度不低于2%，最小讀數(shù)不大于1 Pa。
A.3.3 熱電風速儀：最小讀數(shù)不大于0.1 m/s。
A.3.4 玻璃液體溫度計或電阻溫度計：最小讀數(shù)不大于1℃。
A.4.1 檢測點所在的斷面應選在氣流平穩(wěn)的直管段，避開彎頭和斷面急劇變化的部位。
A.4.2 圓形風管測點位置和數(shù)量：將風管分成適當數(shù)量的等面積同心環(huán)，測點選在各環(huán)面積中心線與垂直的兩條直徑線的交點上，圓形風管測點數(shù)見表A.1。直徑小于0.3 m、流速分布比較均勻的風管，可取風管中心一點作為測點。氣流分布對稱和比較均勻的風管，可只取一個方向的測點進行檢測。
A.4.3 矩形風管測點位置和數(shù)量：將風管斷面分成適當數(shù)量的等面積矩形（最好為正方形）．各矩形中心即為測點。矩形風管測點數(shù)見表A.2。
A.5.1 測量風管檢測斷面面積（F）．按表A.1或表A.2分環(huán)（分塊）確定檢測點。
A.5.2 皮托管法測定新風量測量步驟如下：
a） 檢查微壓汁顯示是否正常，微壓計與皮托管連接是否漏氣；
b） 將皮托管全壓出口與微壓計正壓端連接，靜壓管出口與微壓計負壓端連接；
c） 將皮托管插入風管內(nèi)，在各測點上使皮托管的全壓測孔對著氣流方向，偏差不得超過10°，測量出各點動壓（ Pd）。重復測量一次，取算術(shù)平均值；
d） 將玻璃液體溫度計或電阻溫度計插入風管中心點處，封閉測孑L待溫度穩(wěn)定后讀數(shù)，測量出新風溫度（t）；
e） 調(diào)查機械通風服務區(qū)域內(nèi)設計人流量和實際最大人流量。
A．5.3 風速計法測定新風量測量步驟如下：
a） 按照熱電風速儀使用說明書調(diào)整儀器；
b） 將風速儀放入新風管內(nèi)測量各測點風速，以全部測點風速算術(shù)平均值作為平均風速；
c） 將玻璃液體溫度計或電阻溫度計插入風管中心點處，封閉測孔待溫度穩(wěn)定后讀數(shù)，測量出新風溫度（t）；
d） 調(diào)查機械通風服務區(qū)域內(nèi)設計人流量和實際最大人流量。
A.5.4 按要求對儀器進行期間核查和使用前校準。
A.6.1 皮托管法測量新風量的計算見式（A.1）：
式中：
Q-新風量，單位為立方米每人小時[m3／（h·人）]；
F-新風管測量斷面面積，單位為平方米（m2）；
Kp——皮托管系數(shù)；
t——新風溫度，單位為攝氏度（℃）；
Pd -新風動壓值，單位為帕（pa）；
n——一個機械通風系統(tǒng)內(nèi)新風管的數(shù)量；
P-服務區(qū)人數(shù)，取設計人流量與實際最大人流量2個數(shù)中的高值，單位為人。
A.6.2風速汁法測量新風量的計算見式（A.2）：
式中：
Q-新風量，單位為立方米每人小時[m3／（人·h）]；
F-新風管測量斷面面積，單位為平方米（m2）；
V-新風管中空氣的平均速度，單位為米每秒（m/s）；
n-一個系統(tǒng)內(nèi)新風管的數(shù)量；
P-服務區(qū)人數(shù)，取設計人流量與實際最大人流量2個數(shù)中的高值，單位為人。
A．6.3 換氣次數(shù)的計算見式（A．3）
式中：
A-換氣次數(shù)，單位為次每小時（次/h）；
Q-新風量，單位為立方米每人小時[m3/（人·h）]；
P-服務區(qū)人數(shù)；
V-室內(nèi)空氣體積，單位為立方米（m3）。
皮托管法測量新風管風速范圍為2 m/s--30 m/s，電風速計法測量新風管風速范圍為0.1 m/s～10 m/s。
本附錄規(guī)定了用培養(yǎng)法定性測定集中空調(diào)系統(tǒng)冷卻水、冷凝水及其形成的沉積物、軟泥等樣品中的嗜肺軍團菌，其他洗浴水、溫泉水、景觀水等樣品中的嗜肺軍團菌測定可參照執(zhí)行。
下列術(shù)語和定義適用于本方法。
B.2.1
嗜肺軍團菌 legionella pneumophila
樣品經(jīng)培養(yǎng)在GVPC瓊脂平板上生成典型菌落，并在BCYE瓊脂平板上生長而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長，進一步經(jīng)生化實驗和血清學實驗鑒定確認的菌落。
B．3.1 平皿：Φ90 mm。
B．3.2 CO2培養(yǎng)箱：35℃～37℃。
B．3.3 紫外燈：波長360 nm±2 nm。
B．3.4 濾膜過濾器。
B．3.5 濾膜：孔徑0. 22 μm~0. 45 μm。
B．3.6 真空泵。
B．3.7 離心機。
B．3.8 渦旋振蕩器。
B．3.9 普通光學顯微鏡、熒光顯微鏡。
B．3. 10 水浴箱。
B．3. 11 廣口采樣瓶：玻璃或聚乙烯材料，磨口，容積500 mL。
B．4,1 GVPC瓊脂平板。
B．4.2 BCYE瓊脂平板。
B．4.3 BCYE-CYE瓊脂平板。
B．4.4 革蘭氏染色液。
B．4.5 馬尿酸鹽生化反應管。
B．4.6 軍團菌分型血清試劑。
B．5.1 將廣口采樣瓶（B．3.11）用前滅菌。
B．5.2 每瓶中加入Na2S203溶液（c=0.1 mol/L）O.3 ml_～0.5 mL，中和樣品中的氧化物。
B．5.3 水樣采集位置：冷卻水采樣點設置在距塔壁20 cm、液面下10 cm處，冷凝水采樣點設置在排水管或冷凝水盤處。
B．5.4 每個采樣點依無菌操作取水樣約500 mL。
B．5.5 采集的樣品2d內(nèi)送達實驗室，不必冷凍，但要避光和防止受熱，室溫下貯存不得超過15 d。
B．6.1 樣品的沉淀或離心：如有雜質(zhì)可靜置沉淀或1000 r/min離心1 min去除。
B．6.2 樣品的過濾：將經(jīng)沉淀或離心的樣品通過濾膜（B．3.5）過濾，取下濾膜置于15 mL滅菌水中，充分洗脫，備用。
B．6.3 樣品的熱處理：取1 mL洗脫樣品，置50℃水浴（B．3.10）加熱30 min。
B．6.4 樣品的酸處理：取5 mL洗脫樣品，調(diào)pH至2.2，輕輕搖勻，放置5 mm。
B．6.5 樣品的接種：取洗脫樣品（B．6.2）、熱處理樣品（B．6.3）及酸處理樣品（B．6.4）各0. 1 mL，分別接種GVPC平板（B．4.1）。
B．6.6 樣品的培養(yǎng)：將接種平板靜置于CO2培蕎箱（B．3.2）中，溫度為35℃-37℃，CO：濃度為2. 5%。無CO2培養(yǎng)箱可采用燭缸培養(yǎng)法。觀察到有培養(yǎng)物生成時，反轉(zhuǎn)平板，孵育10 d，注意保濕。
B．6.7 菌落觀察：軍團菌生長緩慢，易被其他菌掩蓋，從孵育第3天開始每天在顯微鏡（B．3．9）上觀察。軍團菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，部分菌落有熒光。
B．6.8 菌落驗證：從平皿上挑取2個可疑菌落，接種BCYE瓊脂平板（B．4.2）和L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板（B．4.3），35℃～37℃培養(yǎng)2 d，凡在BCYE瓊脂平板上生長而在L一半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長的則為軍團菌菌落。
B．6.9 菌型確定：應進行生化培養(yǎng)與血清學實驗確定嗜肺軍團菌。生化培養(yǎng)：氧化酶（-／弱+），硝酸鹽還原（-），尿素酶（-），明膠液化（+）．水解馬尿酸。血清學實驗：用嗜肺軍團菌診斷血清進行分型。
本附錄規(guī)定了用光散射式粉塵儀測定集中空調(diào)系統(tǒng)送風中可吸入顆粒物PM10的質(zhì)量濃度，測量范圍0.001 mg／m3—10 mg／m3。
當光照射在空氣中懸浮的顆粒物上時，產(chǎn)生散射光。在顆粒物性質(zhì)一定的條件下，顆粒物的散射光強度與其質(zhì)量濃度成正比。通過測量散射光強度，應用質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)換系數(shù)K值，求得顆粒物質(zhì)量濃度。
顆粒物捕集性能：捕集效率為50%時所對應的顆粒物空氣動力學直徑Da50為10 μm±o．5μm，捕集效率曲線的幾何標準差仃δg為1.5±0.1。
測量靈敏度：對于校正粒子，儀器1個計數(shù)/min=0.001 mg/m3。
測量相對誤差：對于校正粒子測量相對誤差小于士10%。
測量范圍：0.001 mg／m3～10 mg/m3以上。
儀器應內(nèi)設出廠前已標定的具有光學穩(wěn)定性的自校裝置。
注：校正粒子為平均粒徑0.6 μm，幾何標準偏差δ<1. 25的聚苯乙烯粒子。
C．4.1 檢測點數(shù)量與位置
C．4.1.1 每套空調(diào)系統(tǒng)選擇3個～5個送風口進行檢測。送風口面積小于0.1 m2的設置1個檢測點，送風口面積在0.1 m2以上的設置3個檢測點。
C．4.1.2風口設置1個檢測點的在送風口中心布置，設置3個檢測點的在送風口對角線四等分的3個等分點上布點。
C．4.1.3檢測點位于送風口散流器下風方向15 cm～20 cm處。
C．4.2 檢測時間與頻次
C．4.2.1 應在集中空調(diào)系統(tǒng)正常運轉(zhuǎn)條件下進行檢測。
C．4.2.2每個檢測點檢測3次。
C．4.3 儀器操作
C．4.3.1 對粉塵儀光學系統(tǒng)進行自校準。
C．4.3.2 根據(jù)送風中PM10濃度、儀器靈敏度、儀器測定范圍確定儀器測定時間。
C．4.3.3按使用說明書操作儀器。
C．5 結(jié)果計算
C．5.1 數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換
對于非質(zhì)量濃度的汁數(shù)值，按式（C．1）轉(zhuǎn)換為PM10質(zhì)量濃度：
式中：
c-可吸人顆粒物PM10的質(zhì)量濃度，單位為毫克每立方米（mg／m3）；
R-儀器每分鐘計數(shù)值，單位為個每分鐘（個/min）；
K-質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)換系數(shù)。
C．5.2 送風口PM10濃度計算
第是個送風口PM10的質(zhì)量濃度（ck）按式（C．2）計算：
式中：
cij -第j個測點、第i次檢測值；
n——測點個數(shù)。
C．5.3 集中空調(diào)系統(tǒng)送風中PM10濃度測定結(jié)果
一個系統(tǒng)（a）送風中PM10的測定結(jié)果（Ca）按該系統(tǒng)全部檢測的送風口PM10質(zhì)量濃度（Ck）的算術(shù)平均值給出。
本附錄規(guī)定了用培養(yǎng)法測定集中空調(diào)系統(tǒng)送風中的細菌總數(shù)。
下列術(shù)語和定義適用于本方法。
D.2.1
細菌總數(shù) total bacterial count
集中空調(diào)系統(tǒng)送風中采集的樣品，計數(shù)在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)35℃～37℃、48 h培養(yǎng)所生長發(fā)育的嗜中溫性需氧和兼性厭氧菌落的總數(shù)。
D.3.1 六級篩孔撞擊式微生物采樣器。
D.3.2 高壓蒸汽滅菌器。
D.3.3 恒溫培養(yǎng)箱。
D.3.4 平皿：Φ90 mm。
D.4.1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：
蛋白胨 10 g
氯化鈉 5g
肉膏 5g
瓊脂 20 g
蒸餾水 1000 mL
D.4.2 制法：將蛋白胨、氯化鈉、肉膏溶于蒸餾水中，校正pH為7.2～7.6，加入瓊脂,121℃，20 min滅菌備用。
D.5.1 采樣點：每套空調(diào)系統(tǒng)選擇3個～5個送風口進行檢測．每個風口設置1個檢測點，一般設在送風口下方15 cm～20 cm、水平方向向外50 cm~100 cm處。
D.5.2采樣環(huán)境條件：采樣時集中空凋系統(tǒng)必須在正常運轉(zhuǎn)條件下．并關(guān)閉門窗15 min～30 min以上，盡量減少人員活動幅度與頻率．記錄室內(nèi)人員數(shù)量、溫濕度與天氣狀況等，
D.5.3 采樣方法：以無菌操作，使用撞擊式微生物采樣器（D.3.1）以28.3 L／min流量采集5 min-15 min。
將采集細菌后的營養(yǎng)瓊脂平皿置35℃～37℃培養(yǎng)48 h，菌落計數(shù)。
D.7.1 送風口細菌總數(shù)測定結(jié)果：菌落計數(shù)，記錄結(jié)果并按稀釋比與采氣體積換算成CFU/m3（空氣中菌落形成單位每立方米）。
D.7.2集中空調(diào)系統(tǒng)送風中細菌總數(shù)測定結(jié)果：一個系統(tǒng)送風中細菌總數(shù)的測定結(jié)果按該系統(tǒng)全部檢測的送風口細菌總數(shù)測定值中的最大值給出。
本附錄規(guī)定了用培養(yǎng)法測定集中空調(diào)系統(tǒng)送風中的真菌總數(shù)。
下列術(shù)語和定義適用于本方法。
E.2.1
真菌總數(shù) total fungi count
集中空調(diào)系統(tǒng)送風中采集的樣品，計數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)28℃、5 d培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)。
見D.3。
E.4.1 沙氏瓊脂培養(yǎng)基成分：
蛋白胨 10 g
葡萄糖 40 g
瓊脂 20 g
蒸餾水 1 000 mL
E.4.2制法：將蛋白胨、葡萄糖溶于蒸餾水中，校正pH為5.5～6.0，加入瓊脂，115℃，15 min滅菌備用。
見D.5。
將采集真菌后的沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿置28℃培養(yǎng)5d，逐日觀察并于第5天記錄結(jié)果。若真菌數(shù)量過多可于第3天計數(shù)結(jié)果，并記錄培養(yǎng)時間。
E.7.1 送風口真菌總數(shù)測定結(jié)果：菌落計數(shù)，記錄結(jié)果并按稀釋比與采氣體積換算成CFU/m3（空氣中菌落形成單位每立方米）。
E.7.2集中空調(diào)系統(tǒng)送風中真菌總數(shù)測定結(jié)果：一個系統(tǒng)送風中真菌總數(shù)的測定結(jié)果按該系統(tǒng)全部檢測的送風口真菌總數(shù)測定值中的最大值給出。
本附錄規(guī)定了用培養(yǎng)法測定集中空調(diào)系統(tǒng)送風中的β一溶血性鏈球菌。
下列術(shù)語和定義適用于本方法。
F.2.1
β一溶血性鏈球菌 β-hemolytic streptococcus
集中空調(diào)系統(tǒng)送風中采集的樣品，經(jīng)35℃～37℃、24 h～48 h培養(yǎng)，在血瓊脂平板上形成的典型菌落。
見D.3。
F.4.1 血瓊脂平板成分：
蛋白胨 10 g
氯化鈉 5g
瓊脂 20 g
脫纖維羊血 5 mL～10 mL
蒸餾水 1000 mL
F.4.2制法：將蛋白胨、氯化鈉、肉膏加熱溶化于蒸餾水中，校正pH為7.4～7.6，加入瓊脂，121℃20 min滅菌。待冷卻至50℃左右，以無菌操作加入脫纖維羊血，搖勻傾皿。
見D.5。
F.6.1 培養(yǎng)方法：采樣后的血瓊脂平板在35℃～37℃下培養(yǎng)24 h～48 h。
F.6.2 結(jié)果觀察：培養(yǎng)后，在血瓊脂平板上形成呈灰白色、表面突起、直徑0.5 mm~0.7 mm的細小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；鏡檢為革藍氏陽性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列，受培養(yǎng)與操作條件影響鏈的長度在4個~8個細胞至幾十個細胞之間；菌落周圍有明顯的2 mm～4 mm界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)。符合上述特征的菌落為β溶血性鏈球菌：
F.7.1 送風口β一溶血性鏈球菌測定結(jié)果：菌落計數(shù)，記錄結(jié)果并按稀釋比與采氣體積換算成CFU/m3（空氣中菌落形成單位每立方米）。
F.7.2 集中空調(diào)系統(tǒng)送風中β一溶血性鏈球菌測定結(jié)果：一個系統(tǒng)送風中β一溶血性鏈球菌的測定結(jié)果按該系統(tǒng)全部檢測的送風口β一溶血性鏈球菌測定值中的最大值給出。
本附錄規(guī)定了用液體沖擊法測定集中空調(diào)系統(tǒng)送風中的嗜肺軍團菌。
下列術(shù)語和定義適用于本方法。
G.2.1
嗜肺軍團菌 legionella pneumophila
樣品經(jīng)培養(yǎng)在GVPG瓊脂平板上生成典型菌落，并在BCYE瓊脂平板上生長而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長，進一步經(jīng)生化實驗和血清學實驗鑒定確認的菌落。
G.3.1 微生物氣溶膠濃縮器：采樣流量≥100 L/min.，對于直徑3.0μm以上粒子其捕集效率≥80%或濃縮比≥8。
G.3.2 液體沖擊式微生物氣溶膠采樣器：采樣流量7 L/min-15 L/min.，對于0.5μm粒子的捕集效率≥90%。
G.3.3 離心管：容積50 mL。
G.3.4 平皿：Φ90 mm。
G.3.5 CO2培養(yǎng)箱：35℃～37℃。
G.3.6 紫外燈：波長360 nm±2 nm。
G.3.7 渦旋振蕩器。
G．3.8 普通光學顯微鏡、熒光顯微鏡。
G．3.9 水浴箱。
G.4.1 采樣吸收液1-GVPC液體培養(yǎng)基
G.4.1.1 GVPC添加劑成分：
多粘菌素B硫酸鹽 10 mg
萬古霉素 0.5 mg
放線菌酮 80 mg
G.4.1.2 BCYE添加劑成分：
α一酮戊二酸 1．0 g
N-2酰胺基一2胺基乙烷磺酸（ACES） 10.0 g
氫氧化鉀 2. 88 g
L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.4 g
焦磷酸鐵 0. 25 g
G.4.1.3 吸收液成分：
活性碳 2g
酵母浸出粉 10 g
GVPC添加劑 見G.4.1.1
BCYE添加劑 見G.4.1.2
蒸餾水 1000 mL
G.4.1.4制法：將活性碳、酵母浸出粉加水至1 000 mL，121℃下高壓滅菌15 min，加入GVPC添加劑（G．4.1.1）和BCYE添加劑（G.4.1.2），分裝于滅菌后的離心管（G.3.3）中備用。
G.4.2 采樣吸收液2-酵母提取液
G.4.2.1 吸收液成分：
酵母浸出粉 12 g
蒸餾水 1 000 mL
G.4.2.2制法：將酵母浸出粉加水至1 000 mL，121℃下高壓滅菌15 min，分裝于滅菌后的離心管（G.3.3）中備用。
G.4.3 鹽酸氯化鉀溶液[c（HCI·KCI） =0. 01 mol/L]
G.4.3.1成分：
鹽酸（0.2 mol／L） 3.9 ml_,
氯化鉀（0.2 mol/L） 20 mL
G.4.3.2制法：將上述成分混合，用1mol/L）氫氧化鈉調(diào)整pH=2.2±0.2，121℃下高壓滅菌15 min備用。
G.4.4 其他試劑
G.4.4.1 GVPC瓊脂平板。
G.4.4.2 BCYE瓊脂平板。
G.4.4.3 BCYE-CYE瓊脂平板。
G.4.4.4 革蘭氏染色液。
G.4.4.5 馬尿酸鹽生化反應管。
G.4.4.6 軍團菌分型血清試劑。
G.5.1 采樣點：每套空調(diào)系統(tǒng)選擇3個～5個送風口進行檢測，每個風口設置1個測點，一般設在送風口下方15 cm～20 cm、水平方向向外50 cm～100 cm處。
G.5.2 將采樣吸收液1（G.4.1）20 mL倒入微生物氣溶膠采樣器（G.3.2）中，然后用吸管加入礦物油1滴～2滴。
G.5.3 將微生物氣溶膠濃縮器（G．3.1）與微生物氣溶膠采樣器（G.3.2）連接，按照微生物氣溶膠濃縮器和微生物氣溶膠采樣器的流量要求調(diào)整主流量和濃縮流量。
G．5.4 按濃縮器和采樣器說明書操作，每個氣溶膠樣品采集空氣量1 m3～2 m3。
G.5.5 將采樣吸收液2（G．4.2）20 mL倒入微生物氣溶膠采樣器（（G．3.2）中，然后用吸管加入礦物油1滴～2滴；在相同采樣點重復G.5. 3-G..5.4步驟。
G.5.6 采集的樣品不必冷凍，但要避光和防止受熱，4 h內(nèi)送實驗室檢驗。
G.6.1 樣品的酸處理：對采樣后的吸收液1（G.4.1）和吸收液2（G.4.2）原液各取1 mL．分別加入鹽酸氯化鉀溶液（G.4.3）充分混合，調(diào)pH至2.2．靜置15 min。
G.6.2 樣品的接種：在酸處理后的2種樣品（G.6.1）中分別加入1 mol/L氫氧化鉀溶液，中和至pH為6.9，各取懸液0.2 mL～O.3 mL分別接種GVPC平板（G.4.4）。
G.6.3 樣品的培養(yǎng)：將接種平板靜置于濃度為5%、溫度為35℃～37℃的CO2培養(yǎng)箱（G.3.5）中，孵育10 d。
G.6.4 菌落觀察：從孵育第3天開始觀察菌落。軍團菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，部分菌落有熒光。
G.6.5 菌落驗證：從平皿上挑取2個可疑菌落，接種BCYE瓊脂平板（G．4.5）和L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板（G．4.6），35℃～37℃培養(yǎng)2d，凡在BCYE瓊脂平板上生長而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長的則為軍團菌菌落。
G.6.6 菌型確定：應進行生化培養(yǎng)與血清學實驗確定嗜肺軍團菌。生化培養(yǎng)：氧化酶（-／弱+），硝酸鹽還原（-），尿素酶（-），明膠液化（+）．水解馬尿酸。血清學實驗：用嗜肺軍團菌診斷血清進行分型。
G.7.1 采樣點測定結(jié)果：兩種采樣吸收液中至少有一種吸收液培養(yǎng)出嗜肺軍團菌，即為該采樣點嗜肺軍團菌陽性。
G.7.2 一套系統(tǒng)測定結(jié)果：一套系統(tǒng)中任意一個采樣點嗜肺軍團菌檢測陽性，即該空調(diào)系統(tǒng)送風中嗜肺軍團菌的測定結(jié)果為陽性。
本附錄規(guī)定了用稱重法測定集中空調(diào)系統(tǒng)風管內(nèi)表面的積塵量。
采集風管內(nèi)表面規(guī)定面積的全部積塵，以稱重方法得出風管內(nèi)表面單位面積的積塵量，表示風管的污染程度。
H.3.1 定量采樣機器人或手工擦拭采樣規(guī)格板：采樣機器人采樣面積為50 cm2或100 cm2，采樣精度為與標準方法的相對誤差小于20%;采樣規(guī)格板面積為50 cm2或100 cm2，面積誤差小于5%。
H.3.2 采樣材料：無紡布或其他不易失重的材料。
H.3.3 密封袋。
H.3.4 必要的采樣工具。
H.3.5 分析天平，精度0.000 1g。
H.3.6 恒溫箱。
H.3.7 干燥器。
H.4.1 采樣點數(shù)量：機器人采樣每套空調(diào)系統(tǒng)至少選擇3個采樣點，手工擦拭采樣每套空調(diào)系統(tǒng)至少選擇6個采樣點。
H.4.2 采樣點布置：機器人采樣在每套空調(diào)系統(tǒng)的風管中（如送風管、回風管、新風管）選擇3個代表性采樣斷面，每個斷面設置1個采樣點。手工擦拭采樣在每套空調(diào)系統(tǒng)的風管中選擇2個代表性采樣斷面，每個斷面在風管的上面、底面和側(cè)面各設置1個采樣點；如確實無法在風管中采樣．可抽取該套系統(tǒng)全部送風口的3%～5%且不少于3個作為采樣點。
H.4.3 風管開孔：在風管采樣時將維修孔、清潔孔打開或現(xiàn)場開孔，在送風口采樣時將風口拆下。
H.4.4 采樣：使用定量采樣機器人或手上法（H．3.1）在確定的位置、規(guī)定的而積內(nèi)采集風管表面全部積塵，表面積塵較多時用刮拭法采樣，積塵較少不適宜刮拭法時用擦拭法采樣，并將積塵樣品完好帶出風管。
H.5.1 將采樣材料（H.3.2）放在105℃恒溫箱內(nèi)（H.3.6）干燥2 h后放人干燥器（H.3.7）內(nèi)冷卻4 h，或直接放入干燥器中（H.3.7）存放24 h后，放入密封袋（H.3.3）用天平（H.3.5）稱量出初重。
H.5.2 將采樣后的積塵樣品進行編號，并放回原密封袋中保管．送實驗室。
H.5.3 將樣品按H.5.1處理、稱量．得出終重，
H.5.4 各采樣點的積塵樣品終重與初重之差為各采樣點的積塵重量。
H.6.1 采樣點積塵量：根據(jù)每個采樣點積塵重量和采樣面積換算成每平方米風管內(nèi)表面的積塵量。
H.6.2 風管污染程度：取各個采樣點積塵量的平均值為風管污染程度的測定結(jié)果，以g/m2（風管內(nèi)表面積塵的重量每平方米）表示。
本附錄規(guī)定了用培養(yǎng)法測定集中空調(diào)系統(tǒng)風管內(nèi)表面的細菌總數(shù)和真菌總數(shù)。
下列術(shù)語和定義適用于本方法。
I.2.1
細菌總數(shù)total bacterial count
集中空調(diào)系統(tǒng)送風中采集的樣品，計數(shù)在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)35℃～37℃、48 h培養(yǎng)所生長發(fā)育的嗜中溫性需氧和兼性厭氧菌落的總數(shù)。
I.2.2
真菌總數(shù) total fungi count
集中空調(diào)系統(tǒng)送風中采集的樣品，計數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)28℃、5d培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)。
I.3.1 定量采樣機器人或采樣規(guī)格板：采樣機器人采樣面積為50 cm2或100 cm2，采樣精度為與標準方法的相對誤差小于20%；采樣規(guī)格板面積為25 cm2。
I.3.2 高壓蒸汽滅菌器。
I.3.3 恒溫培養(yǎng)箱。
1.3.4 平皿：Φ90 mm。
I.4.1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：成分與制法見D.4。
I.4.2 沙氏瓊脂培養(yǎng)基：成分與制法見E.4。
I.4.3 吐溫80（Φ=0. 01%）。
I.5.1 采樣點數(shù)量：見H.4.1。
I.5.2 采樣點布置：見H.4.2。
I.5.3 采樣：使用定量采樣機器人或人工法（I.3.1）在確定的位置，規(guī)定的面積內(nèi)采樣，表面積塵較多時用刮拭法采樣、積塵較少不適宜刮拭法時用擦拭法采樣。整個采樣過程應無菌操作。
I.6.1 刮拭法采集的樣品：將采集的積塵樣品無菌操作稱取1g，加入到吐溫80水溶液（I.4.3）中．做10倍梯級稀釋．取適宜稀釋度1 mL傾注法接種平皿。
I.6.2擦拭法采集的樣品：將擦拭物無菌操作加人到吐溫80水溶液（I.4.3）中，做10倍梯級稀釋，取適宜稀釋度1mL傾注法接種平皿。
I.6.3 培養(yǎng)與計數(shù)：分別見D.6和E.6。
I.7.1 風管表面細菌總數(shù)、真菌總數(shù)測定結(jié)果：菌落計數(shù)，記錄結(jié)果并按稀釋比換算成CFU/cm2。
I.7.2集中空調(diào)系統(tǒng)風管表面微生物測定結(jié)果：一個系統(tǒng)風管表面細菌總數(shù)、真菌總數(shù)的測定結(jié)果分別按該系統(tǒng)全部檢測的風管表面細菌總數(shù)、真菌總數(shù)測定值中的最大值給出。
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